生物洁净室无菌工艺模拟试验是采用微生物培养基代替产品对无菌工艺进行评估的验证技术。无菌工艺模拟试验也被称为培养基灌装或培养基灌装试验,通常需要将培养基暴露于设备、容器密封系统的表面和关键环境条件中,并模拟实际生产完成工艺操作。然后将装有培养基的密封容器进行培养以检查微生物的生长,并对结果进行评价,以确定实际生产中产品被污染的概率。
培养基灌装试验需要模拟整个工艺过程,包括从部件、材料的灭菌准备,配制混合,无菌过滤,灌装,一直到完成容器密封的整个过程。培养基灌装是用于评估整个无菌工艺过程,用以表明如果严格按照工艺要求生产,产品的无菌性有可靠保证;但须承认,不管模拟试验还是实际生产总是存在差异的,因此不能将培养基灌装结果与实际生产中的污染概率等同起来,即使获得很好的培养基灌装结果,也不能排除实际生产发生污染的可能性。
培养基灌装应在实际生产相同的条件(环境、设备等)下尽量模拟实际生产完成操作。应充分考虑生产时可能造成污染的各种因素,应对常规生产中的各种干扰活动进行模拟,应模拟常规生产可能遇到的较差条件状况下的操作。
1.生物洁净室培养基灌装技术
培养基的选择和处理,培养基灌装试验频率,生产线较长允许运行时间(长时间生产可能导致污染增加),班次更换、暂停及必要的更衣,灌装批次量,生产线的运行速度及设置,实际生产可能出现的正常干扰次数、类型及复杂程度,以及非常规的干扰和活动(如设备维修、中断、设备的各种调整),环境监测方案和取样操作,关键区域内较多可容纳的总人数及人员可能的活动,容器的密封系统(如规格、大小、类型、对设备的兼容性),无菌条件下的运输、转移次数(如容器转移、加胶塞、加无菌原辅材料),只有经过培养基灌装的人员才能参与实际无菌生产,培养基灌装后应随即对生产设施和设备清洗和灭菌,避免残留培养基造成污染。
2.生物洁净室培养基灌装培养基的选择
胰酪大豆胨液体培养基(TSB)是一种广谱性培养基,特别对无菌工艺环境中源自人体的细菌、芽孢和真菌有良好的促生长效果,是无菌工艺模拟试验常用的培养基。如果产品需充入惰性气体、储存在无氧条件,无菌操作在严格的厌氧环境(即氧气浓度低于0.1%)中进行时,应评估是否采用厌氧培养基。在厌氧的无菌工艺环境监控中反复发现厌氧微生物或在产品无菌检查中发现厌氧微生物时,需评估增加厌氧培养基。用于模拟抑菌性产品的培养基,如有必要需评估抑菌性产品对其促生长能力及模拟试验结果的影响。促生长试验的指示菌除了相关规定以外,还应考虑使用环境监控和无菌检查中的分离菌,以代表实际生产中的可能遇到的污染菌,促菌生长试验的接种量应不超过100CFU。